الموضوع. (Zygophyllum album L.) دراسة مقارنة للمردودية و النشاطية المضادة لألكسدة في المستخلص الكحولي والمائي عند نبات

Transcript

1 الجمهورية الجزائرية الديمقراطية الشعبية وزارة التعليم العالي والبحث العلمي جامعة الشهيد حمة لخضر الوادي رقم الترتيب: رقم التسلسل: كلية علوم الطبيعة والحياة قسم البيولوجيا مذكرة تخرج لنيل شهادة ماستر أكاديمي ميدان: علوم الطبيعة والحياة شعبة علوم بيولوجية تخصص: بيولوجيا وتثمين النبات الموضوع دراسة مقارنة للمردودية و النشاطية المضادة لألكسدة في المستخلص الكحولي والمائي عند نبات (Zygophyllum album L.) من إعداد: بسمة شمسة نوقشت يوم 5300/30/03 من طرف لجنة المناقشة: أستاذ مساعد (أ ( رئيسا جامعة الوادي أحمد عاللى أستاذ مساعد (أ ( مؤطرا جامعة الوادي سمره حماده اسماعيل عسيلة أستاذ مساعد (أ ( ممتحنا جامعة الوادي الموسم الجامعي: 2015/2014

2

3 كام شكر و تقدير إلهي ال يطيب إلليل إال بشكرك وال يطيب إلهنار إال بطاعتك وال تطيب إللحظات إال بذكرك وال تطيب إ ألخرة إال بعفوك و تطيب إجلنة إال برؤيتك كل إلشكر وإمحلد محدإ كثريإ كام ينبغ جلالل وهحه وعظمي سلطانه إلشكر أأوال وأأخريإ هلل سبحانه وتعاىل عىل إمدإدي ابلقوة وإلعزمية المتام و إجناز هذإ إلبحث أأما بعد: أأتقدم ابلشكر إجلزيل إىل وإدلي ووإدليت إىل من لكلهم هللا ابلهيبة وإلوقار و اكان حافز يل عىل موإصةل دإرسيت ذلإ أأطرز من خيوط إلشمس إلالمعة حروف شكر ومن ماء إذلهب عرفان حلرصهم إدلإمئ ابدلعاء يل وتشجيع كام أأتقدم ابلشكر إجلزيل إىل إ ألستاذة إلقديرة حامده مسره إليت مل تبخل عيل بتوجهيااها ونصائها إلقمية طيةل إرشإفها عل هىذإ إلعمل أأتقدم ابلشكر إجلزيل إىل إ ألستاذ مشسة أأمحد خليفة عىل مد يد إلعون يل و إىل إدلكتور حليس يوسف و بلمسعود رشيد كام أأتقدم ابلشكر إىل أأعضاء جلنة إملناقشة إذلين تفضلو إ وقبلوإ إملناقشة أأمحد عىل إملساعدة إليت قدهما يل إ ألستاذ عسيةل إسامعيل و عاليل كام تتسع دإئرة شكري إىل إ ألستاذة هاميم هادية و بره مجيةل عىل إملعلومات وإلنصاحئ إلقمية. وإىل مجيع موظفني وعامل إخملابر بلكية علوم إلطبيعة وإحلياة وإىل مجيع زمياليت وطلبة دفعة ماسرت 2015 و إىل لك من ساعدين من قريب وبعيد يف إجناح هذإ إلعمل بسمة

4 الصفحة الفهرس مقدمة الجزء النظري الفصل األول: دراسة نبات Zygophyllum album L I.مدخل ZYGOPHYLLACEAE العائلة الرطراطية.II Zygophyllum album L نبات.III Zygophyllum album L التصنيف النباتي ل.1.III.2.III الوصف المورفولوجي للنبات.3.III التركيب الكيميائي.4.III استعماالته.5.III التوزيع الجغرافي.6.III الظروف المناخية الفصل الثاني: مواد األيض الثانوي I.مدخل Les alcaloïdes القلويدات.II Les alcaloïdes تعريف القلويدات.1.II.2.II تواجد وتوزيع القلويدات.3.II تصنيف القلويدات.4.II خصائصها.5.II دور القلويدات وفائدتها بالنسبة للنبات.6.II دور القلويدات و فائدتها العالجية Les polyphénols عديدات الفينول.III.1.III تعريف عديدات الفينول.2.III مصدرها.3.III أقسام عديدات الفينول.4.III أهمية ودور عديدات الفينول في النباتات

5 III االستعماالت العالجية لعديدات الفينول.6.III المجموعات الفينولية Les Flavonoïdes الفالفونيدات.1.6.III Les Flavonoïdes تعريف الفالفونيدات III III أهمية الفالفونيدات بالنسبة للنبات Les acides phénoliques األحماض الفينولية.0.2.III III تعريف األحماض الفينولية III الخصائص البيولوجية و العالجية لألحماض الفينولية Les tannins الدباغ )التانينات(.3.6.III III تعريف الدباغ III دور التانينات بالنسبة للنبات III فوائد و إستعماالت التانينات Les terpènes Les terpènes التربينات.IV.7.IV تعريف التربينات.0.IV تصنيف التربينات.3.IV االستعماالت المختلفة للتربينات I. اإلجهاد التأكسدي I.7. المؤكسدات )الجذور الحرة( I.0. أهم األنواع األكسيجينية النشطة I.3. مصادر األنواع األكسجينية النشطة الفصل الثالث: االجهاد التاكسدي و مضادات األكسدة I.2. تأثير اإلجهاد التأكسدي على الجزيئات الداخلية I.5. اإلجهاد التأكسدي وعالقته باألمراض.2.I مضادات األكسدة I.1.2. مضادات األكسدة اإلنزيمية I I الكاتاالز فوق أكسيد الديسميوتاز (SOD) Superoxide dismutase Catalase I جلوتاثيون بيروكسيداز Glutathion peroxidase (GPx)

6 I.2.2. مضادات األكسدة غير اإلنزيمية E و الفيتامين C الفيتامين I Glutathion الجليتاثيون I Carotenoides الكاروتينويدات I I المشتقات الفينولية النباتية I.7. الفالفونويدات والنشاط المضاد لألكسدة I.7.7. آلية الفالفونيدات المضادة لألكسدة I.0.7. تفاعل الفالفونويدات مع الجذور الحرة الجزء العملي الفصل األول: المواد والطرق I. األدوات و المواد المستعملة في الدراسة I.1. األدوات واألجهزة المستعملة I.0. المواد الكيميائية المستعملة.II المادة النباتية.7.II القطف.0.II التجفيف.3.II الطحن.III طرق العمل Zygophyllum album L الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في نبات.1.III.1.7.III القلويدات.2.7.III الفالفونيدات.3.7.III التربينات.0.III الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في المستخلصين المائي و الكحولي لنبات Z. album.1.2.iii الكشف عن الصابونين.2.2.III الكشف عن التانينات.3.2.III الكشف عن الفالفونيدات.4.2.III الكشف عن القلويدات.Z album طريقة تحضير المستخلص المائي و اإليثانولي لنبات.3.III

7 III حساب المردودية االنتاجية للمستخلصات.5.III تقدير المركبات الفينولية و الفالفونيدية لمستخلصات لنبات.1.3.III تقدير المركبات الفينولية الكلية.2.5.III التقدير الكمي للفالفونيدات.6.III تقدير الفاعلية المضادة لألكسدة )CAT( اختبار القدرة الكلية المضادة لألكسدة.7.2.III DPPH اختبار تثبيط الجذر الحر.2.2.III I. نتائج اختبارات الكشف الكيميائي I.7. اختبارات الكشف الكيميائ ي Zygophyllum album L I.1.7. القلويدات I.2.7. الفالفونيدات I.1.3. التربينات الفصل الثاني: النتائج والمناقشة لبعض المواد الفعالة في نبات I.2. اختبارات الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في المستخلصين المائي واإليثانولي لنبات.Z album I.3. المردودية إلنتاجية المستخلصات.Z album تقدير المركبات الفينولية و الفالفونيدية للمستخلصات نبات I.2. DPPH I.7.2. تقدير المركبات الفينولية الكلية I.0.2. تقدير المركبات الفالفونيدية I.5. تقدير الفاعلية المضادة لألكسدة )CAT( اختبار القدرة الكلية المضادة لألكسدة I.7.3. DPPH DPPH اختبار تثبيط الجذر الحر I.0.3. I نتائج القدرة التثبيطية للجذر الحر I تحديد مقدار IC50 المثبطة للجذر الحر الخاتمة قائمة المراجع باللغة العربية قائمة المراجع باللغة األجنبية الملحق الملخص

8 قائمة الوثائق الرقم عنوان الوثيقة نبات Z. album الشكل التخطيطي لنبات.Z album البنية العام للفالفونيدات وحدة اإليزوبرين اآللية التفاعلية اإلجمالية تلخص نزع السمية بواسطة مختلف اإلنزيمات المضادة لألكسدة آلية التخلص من الجذور اللبيدية بواسطة Vit. C و Vit. E و الجلتاثيون المواقع الفعالة في النشاط المضاد لألكسدة للفالفونيدات تفاعل الفالفونيدات مع ROS مخطط يوضح مراحل االستخالص للمستخلصين اإليثانولي والمائي لنبات Z. album جهاز Rotavapeur المستعمل في الدراسة التحول الذي يحدث للجذرالحر DPPH توضح نتائج اختبارات الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في نبات Z. album صورة تبين المستخلصين المائي و اإليثانولي لنبات.Z album الصفحة

9 الرقم قائمة األشكال عنوان الشكل المردودية إلنتاجية المستخلص المائي و اإليثانولي لنبات.Z album منحنى عيارية لحمض الغاليك للمستخلص اإليثانولي. منحنى عيارية لحمض الغاليك للمستخلص المائي. كمية عديدات الفينول بالملغ مكافئ لحمض الغاليك /غ من وزن المستخلص الصفحة )mgAGE /g Extract) منحنى عيارية للمركب الكرستين للمستخلص اإليثانولي. منحنى عيارية للمركب الكرستين للمستخلص المائي. كمية الفالفونيدات بالملغ مكافئ للكرستين /غ من.)mg QE / g Extract) وزن المستخ صل منحنى عيارية لحمض األسكوربيك في اختبار موليبدات الفوسفات للمستخلص ايثانولي. منحنى عيارية لحمض األسكوربيك في اختبار موليبدات الفوسفات للمستخلص المائي. نتائج اختبار تقييم النشاطية.(mg AAE/g Extract) يمثل منحنيات النشاطية في تثبيط جذرالحر يوضح قيم المضادة DPPH IC 50 للعينات المدروسة. لألكسدة الكلية بداللة التراكيز.

10 قائمة الجدوال الرقم عنوان الجدول يبين التصنيف النباتي لنبات Zygophyllum album L أقسام عديدات الفينول يوضح نتائج الكشوفات الكيميائية للمستخلصين المائي و اإليثانولي لنبات Z. album نسبة تثبيط (%) الجذر الحر DPPH الصفحة

11 قائمة المختصرات A.A: Acide ascorbique. ADN: Acide Désoxyribonucléique. BHT: butylhydroxytoluène CAT : capacité antioxydante totale (Total antioxidant capacity). CAT: Catalase. DPPH: 2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazyl. E.Aq: extract Aqueous. E.Eth: extrait éthanoliques. GPx: Glutathion peroxidase. GR: Glutathion reductase. GSH: Gluthathion. GSSG: Oxidized glutathione. IC 50 : Concentration permettant d inhiber 50 % du radical DPPH. NO : Nitric oxide. NOS: Nitric oxide synthase. O 2 - : Superoxide anion. OH : Hydroxyl radical. ONOO - : Peroxynitrite. OMS : L'organisation mondiale de la santé. % : Rendement en %. ROS: Reactive oxygen species. SOD: Superoxide dismutase. ssp : Espèce. UV : Ultraviolet. Z. album : Zygophyllum album L.

12 مقدمة

13 مقدمة مقدمة إن الجزائر بلد يطل على البحر األبيض المتوسط ويتوسط بلدان المغرب العربي ويمتد جنوبا في العمق الصحراوي و يتميز بتنوع التربة و المناخات بحري قاري و صحراوي لهذا التنوع في المناخ والتربة األثر البالغ في اختالف الغطاء النباتي الطبيعي و هذا ما األنواع من شتى بأنواع تزخر عالجية غير محدودة يمكن أن أجل من و من جهة في أخرى النباتية ومن أبرزها ثروتها تلبي االحتياجات األساسية في ال الغذاء فيها نتناول مرة كل من النباتات الطبية مجال الصحة. هذه أن ببالنا يخطر جعل التي تملك التي المواد الحياة تسبب في نفس الوقت فضالت ينتج عنها أكسدة لها تأثير سلبي علينا لذا يخضع البعض هذه من الجسم تنظيف معينة فقط. و يفضل معظم األطباء أسبوع لمدة الصيام مثل المواد أو السوائل بتناول واالكتفاء وال ش ك الجزائر فضائل تضمن إلى لنا برامج مؤكوالت أن تكون عملية تنظيف الجسم على قاعدة أنواع معينة من األعشاب الطبية المفيدة التي تعمل كمضادات للتأكسد مع اتباع نظام حمية خاص ومن ابرزها االعشاب التي يمكن القرنقل الطهي في استخدامها والثوم والكمون واالوريغانو تعتبر بهارات الكاري الهندي مضادة لالكسدة عالية الفعالية. كما والزنجبيل والقصعين والزعتر كما البري ترتبط وظائف الجسم بتفاعالت األكسدة واإلرجاع التي تؤدي إلى إنتاج األنواع األكسجينية النشطة ومضادات األكسدة الطبيعية فالتوازن بين إنتاج هذه الجزيئات والتخلص منها يضمن الحفاظ على الوظائف الفيزيولوجية الطبيعية للجسم )2006 al., )OZGEN et إال أن اإلفراط في إنتاجها يؤدي إلى أضرار على المستوى الجزيئي مسببا ضرر األنسجة وحدوث العديد من األمراض و يمكن حماية الجسم من أضرار هذه الجزيئات عن طريق مضادات األكسدة والتي تستعمل بكثرة كإضافات في األغذية أو أشكال صيدالنية مختلفة )بن سالمة 2012(. استغالل و مضادة الواقع وفي أن مضادات األكسدة البحوث من لكثير موضوع هي الطبيعية الجديدة المركبات الثانوية من بينها مادة البوليفينول و الفالفونيدات التي لهما خصائص مضادة للمواد المسرطنة (2012.(BENHAMMOU, و تعتبر المصدر هي الطبية النباتات الرئيسي للمركبات الفينولية كمنتجات تفاوت واختالف في طرق األستخالص لهذه المركبات وتنجم عنها فعالية مختلفة في ثانوية نحو لألكسدة إال انه هناك النشاطية المضادة لألكسدة فماهي أسس هذه االختالفات وتأثيرها على النشاطية المضادة لألكسدة للمواد الفعالة المستخلصة العمل هذا و من اجل معرفه مدى اهمية و تأثير طرق األستخالص في الفعالية المضادة لألكسدة تم انجاز والمتمثل في دراسة مقارنة لطريقتين في استخالص المواد الفعالة لنبات Zygophyllum album L وكذا فعاليته للنشاطية المؤكسدة لهذه المستخلصات ويعتبر هذا النبات

14 مقدمة و الطبي من أهم كنوز النباتات الطبية في جنوب الجزائري أساسا في عالج عدة أمراض. حيث يستخدمه سكان الجزائر تقليديا والهدف من هذه الدراسة هو إظهار الطريقة األحسن في استخالص المواد الفعاله من هذا النبات واألهم من ذلك ابراز المستخلص األكثر فعالية للنشاطية المضادة لألكسدة. العائلة ومن أجل انجاز هذا البحث تم تقسيم هذا العمل الى جزأين : جزء نظري: التي ينتمي إليها يحتوي على ثالثة فصول ففي الفصل األول تمحور حول دراسة نبات.Z album الرطراطية Zygophyllacées و المركبات الفعالة مثل: القلويدات وعديدات الفينول و التربينات...الخ في الفصل بعض دراسة شمل الثاني و في الفصل الثالث تم التطرق الى دراسة اإلجهاد التأكسدي و الجزيئات األوكسجينية النشطة ومضادات األكسدة األنزيمية والغير اإلنزيمية. جزء عملي: إلنجاز هذا البحث كما نشير إلى يحتوي على فصلين في الفصل األول تم التطرق الى كافة المواد والطرق المتبعة أهم األعمال المنجزة في هذا البحث حيث تم إجراء الكشف الكيميائي لبعض الم و اد الفعالة التي يحتويها النبات و في مستخلصاته المائية و اإليثانولية و كذلك تحضيرها تم التقدير وبعدها الكمي وفي إطار تحديد مدى نشاطيهما موليبدات الفوسفات (CAT) للمركبات الفينولية المضادة لألكسدة و تطرقنا الى تحليل و مناقشة مختلف النتائج. الثانية بطريقة الفالفونيدية و استعملنا طريقتين: الحر الجذر تثبيط و في األخير الخاتمة لخصت فيها كل النتائج التي تم الحصول عليها. إلى طرق للمستخلصين اإليثانولي والمائي. األولى تتمثل في في و.DPPH اختبار الفصل الثاني

15 النظري الجزء

16 الفصل األول Zygophyllum album L

17 Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات I.مدخل منذ آالف السنين عرف اإلنسان العديد من األمراض و سعى دائما لعالجها أو التخفيف من آالمه لذلك استخدم مختلف الموارد الموجودة في البيئة الطبيعية للعالج وعالج جميع أنواع األمراض و من بينها التدواي بالنباتات و تسمى هذه النباتات بالنباتات الطبية. لطالما اعتبرت النباتات الطبية مصدرا أساسيا لصحة اإلنسان و ال تزال العديد من الثقافات التقليدية تثمن الوصفات الطبية النباتية و أهميتها الوقائية و العالجية و منافعها األخرى.يتقدم علم التداوي باألعشاب بمفهومه الحديث تقدما كبيرا في مختلف أرجاء العالم و يزداد االهتمام بدراسة النباتات الطبية في مجال البحث البيوصيدالني نظرا لخصائصها العالجية و كلفتها المنخفضة و سهولة الحصول عليها و العالقة التراثية بها و االعتقاد الشعبي السائد بأن األدوية النباتية أكثر أمانا و نجاعة من العقاقير المصنعة )بن سالمة 2012). منظمة الصحة العالمية (OMS) تقدر أن حوالي 80 حاليا من سكان العالم يستخدمون المستحضرات النباتية التقليدية للشفاء فمثال في أفريقيا حوالي 80 من السكان يستخدمون النباتات الطبية التقليدية وتعتبر المصدر الوحيد لألدوية و في الصين حوالي 40 من السكان يستخدمون النباتات الطبية في الرعاية الصحية وكذلك بعض بلدان أمريكا الالتينية أن 71 من سكان شيلي يستخدمون الطب التقليدي وكذلك 40 من سكان بريطانيا وتشير كل هذه األرقام إلى أن الناس يتحولون مرة أخرى إلى الطب التقليدي خاصة اتجاه النباتات التقليدية الطبية في كثير من البلدان المتقدمة فإن شعبية الطب التقليدية )الذي يسمى بالطب التكميلي( تغذيها المخاوف بشأن اآلثار الضارة للعقاقير كيميائية. في الواقع منظمة الصحة العالمية لديها استراتيجية لحماية المواد الخام في النباتات ألن األبحاث وجدت في النباتات من الجزيئات الجديدة النشطة أو المواد الخام للدور نصف التصنيع التي تستخدم في الصيدلة لصناعة العقاقير المشتقة من النباتات (2006.(MEDJDOUB, 01

18 Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات ZYGOPHYLLACEAE العائلة الرطراطية.II و هي عائلة مكونة من حوالي 27 جنس و 285 نوع معظم نباتات هذه العائلة شجيرات أعشاب و نادرا ما تكون شجرة في الغالب محدودة قي المناطق الجاف و الشبه الجاف للمناطق االستوائية و الشبه االستوائية 2012) al.,.(belguidoum, 2012 ; MNAFGUI et 3 من حيث لوحظ في الصحراء 7 أجناس و 27 نوعا اذا تشكل العائلة الرطراطية أكثر من النباتات الصحراوية (1991.(OZENDA, األجناس الرئيسية لهذه العائلة هي:.(80 ssp) Zygophyllum.(40ssp( Fagonia.(20 ssp( Balanites.(20ssp) Tribulus ونصادف في الواليات المتحدة القارية أجناس ل Zygophyllum :)6SPP( Guaiacum.(JUDD et al., 2002; MICHEL, 2010( Kallstroemia Larrea Porlieria Tribulu العديد من األنواع النباتية لهذه العائلة لها خصائص عالجية معروفه وهي التقليدي في عالج الكثير من األمراض نذكر بعض األمثلة ألنواع لها أهمية عالجية: تستخدم في الطب : Balanites aegyptiaca مضادة لأللتهاب مضادة للفطريات هو نبات غني مطهر مستخلصاته المائية في عالج اليرقان و مرض السكري. بالصابونين مكافحة المالريا : Larrea divaricata هو نبات شعبي في الطب االلتهابية و الروماتيزم والحمى. لديه العديد من األنشطة نذكر منها مضاد للفيروسات يتم استخدامه في عالج األورام تقليديا تستخدم األمراض :Larrea tridentata وهو نبات صحراوي له استعماالت عالجية كثيرة يمكن أن يستخرج منه عالج لحب الشباب الصدفية لأللتهابات ومضاد لألكسدة. مضاد لفطريات ومضاد للفيروسات : Zygophyllum eichwaldii هذا النوع له العديد من الخصائص لمرض السكري مضاد للجراثيم مضاد للفطريات. كما أن لديها أنشطة مسكنة مضاد مطهر ضد األكزيما مضاد 01

19 و: Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات Zygophyllum coccineum هو نبات شائع في الطب التقليدي عند البلدان البحر األبيض المتوسط ويتم استخدامه ضد الروماتيزم النقرس و ارتفاع ضغط الدم و مرض السكري (2008.(AYAD, :Peganum harmala يستخدم المستخلص له في عالج مرض السكري و ارتفاع ضغط الدم الروماتيزم والربو وأيضا مضادة للبكتيريا ومضادة للفطريات (2004 al., ; MONSEF et HERMAS., 2008 (IDRISSI et, ومضاد لاللتهاب و اليرقان واألكزيما والمالريا ومضادة لألكسدة والسرطان )2013.)DIWAN, : Zygophyllum gaetulum معروفة جيدا بخصائصه المضادة للسكري و كذلك مضاد للتشنجات األكزيما وعالج جيد للمعدة (2001 al.,.(aquino et :Zygophyllum geslini يستخدم هذا النوع ضد مرض السكري كما أن لديه أنشطة سامة للخاليا.(MEDJDOUB, 2006) cytotoxiques يوجد الكثير من االنواع ل Zygophyllaceae تكون سامة للبشر مثل الحرمل و البلوط وللحيوانات مثل.(BRUNETON, 2002) Tribulus ssp 01

20 Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات Zygophyllum album L نبات.III يعرف هذا النبات بإسمه الشائع» بوقريبة «)حليس 2007) ويدعى» Agga «حسب.MAIZA et al (1993) «Aggaia» أو CHEHMA et DJEBAR (2008) Zygophyllum album L التصنيف النباتي ل.1.III التصنيف النباتي ل Zygophyllum album L حسب (2012) BENHAMMOU و GUENZET (2012) و (2006) al., TIGRINE et يصنف كما هو موضح في الجدول (01): الجدول 01 : يبين التصنيف النباتي لنبات Zygophyllum album L المملكة الشعبة تحت الشعبة الطائفة تحت الطائفة الرتبة العائلة تحت العائلة الجنس النوع النباتية نباتات الذرية Spermaphytes مغلفات البذور Angiospermes ثنائيات الفلقة Dicotylédones الوردية Rosidae Zygophyllale Zygophyllaceae Zygophylloideae Zygophyllum Zygophyllum album L 53

21 Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات الوثيقة 01 : نبات.(ZEGHEB,2013( Z. album.األزهار : C األوراق : B الثمار : A الوصف المورفولوجي للنبات.2.III وهو عبارة عن شجيرات صغيرة كثيرة التفرع األوراق منتفخة عصيرية خضراء باهتة تغطيها طبقة من الشعيرات أو الحراشف البيضاء والتي تظهر مثل الغبار وعند بلوغ األوراق يتحول لونها إلى األصفر أو البرتقالي وال تلبث أن تسقط.األزهار بيضاء صغيرة وحجمها قريب من حجم األوراق وتعطي عند البلوغ ثمارا خماسية الفصوص كما في الوثيقة (02( )حليس 2007). 50

22 Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات الوثيقة 02 : الشكل التخطيطي لنبات.Z album )حليس 2007). 1- من الناحية الشكلية (المورفولوجية) أوراق بوقريبة هي أوراق مركبة من وريقتين لحميتين. 2- الزهرة. - 3 السداة تتميز بخيط واسع وعريض في جزئها السفلي. - 4 يمكن تمييز األنواع المختلفة بواسطة الثمار )حليس 2007). 55

23 Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات.3.III التركيب الكيميائي المكونات الرئيسية ل.Z album هي: حمض,β-sitostérol-β-D-glucopyranoside,Quinovique غلوكوسيدات,Glycosides جليسيدات,Glucides التانينات,Tannins القلويدات Alcaloïdes ستيرويدات,Cardenolides,Lactones الالكتونات,Acides Amines األحماض األمينية,Stéroïdes.Saponines Stérols insaturés et Triterpéniques وباإلضافة إلى ذلك ستة فالفونيدات واثنين من األحماض الفينولية وقد تم عزلها والتعرف عليها و تحديدها مثل : isorhamnétine-3-oβ-glucopyranoside, isorhamnétine-3-o-α-rhamnopyranosyl-(1/6)-o-β-glucopyranoside 7di-O-β-glucopyranoside, isorhamnétine-3-o-β-galactopyranosid, (isorhamnétine-3-o-rutinoside), isorhamnétine-3-o-α-rhamnopyranosyl-(06.01) -O-βgalactopyranoside(isorhamnetin3-O-robinoside), isorhamnétine-3-o-β-glucopyranoside-7- O-α- rhamnopyranoside, l'acide gentisique, 5-O-α-rhamnopyranoside. حسب 2012) al.,( MNAFGUI et و (2007) al., AMAL et و (2012) al,. KHALDI et و يحتوي كذلك على الزيوت الطيارة و قد تم تقدير مركبات طيارة منه وكان (E)-b-damascenone (%11.8) و يعتبر المكون الرئيسي له )2006 al.,.(tigrine et.4.iii استعماالته يستعمل في مجال التداوي باألعشاب حيث يستخدم الجزء الهوائي )األوراق السيقان الثمار( من هذا النبات كمنقوع أو مغلي أو حتى مطحون كدواء فعال ضد الروماتيزم النقرس الربو ارتفاع ضغط الدم كما أنه يستخدم أيضا كمدر للبول مخدر موضعي مضاد للهيستامين مضاد لمرض السكري طارد لغازات مطهر ومنشط كذلك مضاد لإلسهال ( 1991 SHAHBA, ;.(EL GHOUL et al., 2012 ; ATTA et MOUNEIR, 2004 وحسب دراسة أجريت على.Z, album أن الزيت األساسي المستخلص من األجزاء الهوائية من هذا النبات يتميز برائحة قوية تشبه رائحة المسك لذلك يمكن أن يستخدم في مجال صناعة العطور.(TIGRINE et al., 2006( 50

24 Zygophyllum album L الفصل األول دراسة نبات.5.III التوزيع الجغرافي مستوطن في منطقة الصحراء الكبرى )حليس 2007 ( حيث يتوزع في جميع أنحاء صحراء شمال افريقيا إلى شبه الجزيرة العربية وفي المناطق االستوائية لشرق افريقيا و كذلك لديه توزيع جغرافي واسع في مصر وهو يتواجد في األهواد المالحة والجافة في الشريط الساحلي للبحر األبيض المتوسط والبحر األحمر( 1986 WHITE,.(CHEHMA, 2006;.6.III الظروف المناخية مع نبات Z. album المالحة الترب ينمو في جميع األماكن بما فيها المناطق المالحة وهو يعتبر من النباتات المتكيفة )حليس 2007 ) وهو يمثل مجموعة من النباتات العصارية التي تقاوم الجفاف و الملح و بذلك يستطيع العيش تحت الظروف المناخية شديدة الجاف عموما التربة تدعم هذه األنواع التي لها محتوى من الملح إلى 5.5 في الطبقة العلوية )0-25 سم( ومحتوى من الكربونات من و نمو وتوزيع األنواع ل Zygophyllum يعتمد على الطبيعة الكيميائية للتربة.(TIGRINE et al., 2006; HAMMAD et QARI, 2010) إلى 52

25 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي

26 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي I. مدخل جميع الكائنات الحية لديها األيض األساسي الذي يوفر لها الجزيئات األساسية )األحماض النووية الدهون البروتينات األحماض األمينية و الكربوهيدرات( تنتج إنما 2013( النباتات تأتي نتيجة عدد كبير من للتفاعالت )MOHAMMEDI, المركبات و التي ليست الكيميائية الالحقة في المتمثلة و و في المملكة النباتية باإلضافة إلى هذا مستمدة مباشرة من عملية التمثيل الضوئي تسمى المركبات الفينولية المركبات األزوتية )القلويدات(...الخ )2013.(ZEGHEB, تنتج المركبات الثانوية بكميات صغيرة )عمر 2010). في النبات تحمل النباتات لمختلف آكالت األعشاب ويتوقف هذه المركبات و بالمواد التربينات إنتاجها على العائلة و و األيض الثانوي الستيرويدات و الجنس و النوع المركبات الثانوية هي مجموعة من الجزيئات التي لديها العديد من الوظائف الهامة حيث تلعب دورا مهما و اإلجهادات في التكيف النباتات لبيئتها ضد الجفاف و ضوء فهي تعمل بطريقة فعالة جدا في األشعة فوق البنفسجية تثبيط الهجوم الممرض من البكتيريا والفطريات و UV.(BOUKRI, 2014( في الوقت الحاضر العديد من هذه المركبات تستخدم في الطب الحديث أساس المكونات النشطة الموجودة في النباتات الطبية العالجية )2013,.(BOUKRI, 2014 ; MOHAMMEDI و ضد الحشرات المفترسة وتعتبر هذه الجزيئات هي ومن المحتمل تمثل مصدرا كبير لمختلف العوامل هناك أكثر من مركبات ثانوية المنتمية لها إلى ثالث عائالت رئيسية: وتنقسم هذه المركبات الثانوية وفقا إلى البنية الكيميائية القلويدات عديدات الفينول.)KANOUN, 2011) التربينات 52

27 ا) الفصل الثاني مواد األيض الثانوي Les alcaloïdes القلويدات.II Les alcaloïdes تعريف القلويدات.1.II أقترح مصطلح قلويد ألول مرة سنة 1818 م من طرف الباحث Meisser )حوه 2013 (, تعتبر القلويدات أحد أهم المنتجات الطبيعية التي ينتجها النبات الطبي (طه 1981). تحتوي على عنصر النيتروجين نباتي القلويدات هي قواعد أزوتية معقدة التركيب ذات أصل معظم القلويدات يحتوي التركيب كعنصر أساسي مما يعطي الصفات القلوية لها (2006 (MAURO, ذرة األوكسجين مثل المجموعة الهيدروكسيلية أو مجموعات فعالة بها البنائي لها على المجموعة الكيتونية كما يحوي الكثير منها في البنية التركيبية على حلقة غير متجانسة أو أكثر )الحازمي 1995(. 100 من القلويدات المختلفة إال أن تركيزها ال يتجاوز 10 من قد يحتوي النبات أكثر من الوزن الجاف لنبات (2006.(MAURO,.2.II تواجد وتوزيع القلويدات لقد كان المصدر الرئيس للقلويدات في الماضي النباتات الزهرية (أبو زيد 2005), إال أنه في الكائنات الحشرات الوقت الحاضر قد تم عزل الكثير من هذه المركبات من مصادر مختلفة مثل: هذا وال يزال عدد القلويدات التي تم استخالصها من النباتات الزهرية البحرية الدقيقة و النباتات الدنيا وتوجد القلويدات بكثرة عند مغلفات يفوق عدد القلويدات التي تم استخالصها من المصادر األخرى وتتوزع القلويدات في ثنائيات الفلقة في البذور وخاصة عند ثنائيات الفلقة مقارنة بأحاديات الفلقة. الفصيلة المركبة Solanaceae الفصيلة الباذنجانية Papaveraceae الفصائل التالية: الفصيلة الخشخاشية Lamiaceae الفصيلة البقلية Asteraceae الفصيلة الدفلية Apocynaceae الفصيلة الشفوية Fabaceae الفصيلة الزنبقية Lilaceae لحازمي 1995)..3.II تصنيف القلويدات توجد العديد من التصنيفات للقلويدات تبعا لمصادرها وتأثيراتها وكذلك لألحماض األمينية المخلقة منها (أبو زيد 2005 ) وقد تلجأ بعض المصادر إلى تصنيف القلويدات وفقا للفصائل النباتية المستخلصة منها ولكن تزايد اكتشاف المئات من هذه المركبات في الوقت الحاضر حال دون استخدام مثل هذا التقسيم. وهناك تصنيف جامع إلى حد ما لألنواع المختلفة من القلويدات )الحازمي, 1995). وتنقسم إلى ثالثة أقسام رئيسة هي: قلويدات األولية القلويدات الحقيقة و القلويدات الكاذبة ( 2014.(BOUKRI, 51

28 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي.4.II خصائصها ماعدا القلويدات التي ال تحتوي على عنصر األوكسجين فإنها معظم القلويدات صلبة متبلورة و معظمها عديمة اللون مثل سائلة مثل النيكوتين Nicotine )الحسني والمهدي ; 1990 طه 1981 ) ذو اللون البرتقال Magnophlorine و والقليل منها ملون مثل Berberine لونه أصفر Coniine )أبو زيد 2005 (. ومرة الطعم مثل Ephedrine في مختلف المذيبات تتغير بداللة القلويدات مركبات قاعدية تعطي أمالح مع األحماض وذوبا نيتها الالقطبية تذوب في المذيبات العضوية في الحالة القاعدية ph و حسب الحالة القاعدية و الملحية أما في وال تذوب في الماء وفي المذيبات العضوية القطبية ( الكحوالت( )اإليثر و الكلوروفورم( وتذوب في المذيبات العضوية القطبية و تذوب الحالة الملحية ال تذوب في المذيبات العضوية الالقطبية فعاليتها و قوة البيولوجية أنشطتها لشدة العالية Toxicity في الماء )العابد 2009(. تتميز القلويدات بالسمية الفيسيولوجية ) أبو زيد 2005)..5.II دور القلويدات وفائدتها بالنسبة للنبات القلويدات النباتية تلعب دورا بيولوجيا و فيسيولوجيا هاما خالل فترات دورة الحياة النباتية وتعتبر كمواد مخزنة للنتروجين متمثال في الفعالية الحيوية كمنظمات للنمو(أبو زيد ( 2005 كما تلعب دور دفاعي للنبات لما تحتويه من ولمواد أخرى التي يحتاجها النبات خالل مراحل النمو وعالوة على ذلك آكالت األعشاب والكائنات الحية الدقيقة. مواد سامة بحيث تقيه من الحشرات و القلويدات تحمي النباتات من التلف التي تسببها األشعة فوق البنفسجية.(MAURO, (2006 UV.6.II دور القلويدات و فائدتها العالجية المورفين Morphine و فمثال القلويدات للقلويدات يختلف حسب نوع إن التأثير الطبي يعتبر منبها و مزيل Caffeine والكافيين قلويدان مسكنان ومخدران Codaine الكودايين و و الفلفلين Piperine يعتبر مقو للمعدة مخفف لآلالم Papaverine و بابافيرين التعب يستعمل لعالج الروماتيزم و عرق النسا (حوه 2013) و اإلفدرين Colchicine كولشيسين Ephedrine يسبب ارتفاع ضغط الدم ويستعمل قلويداألتروبين Atropine في جراحة العيون حيث يعمل على توسعة حدقة العين )العابد 2009 (. 51

29 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي Les polyphénols عديدات الفينول.III.1.III تعريف عديدات الفينول نب نب نضرا لكثرة عددها وتباين تشكل المركبات الفينولية حيزا كبيرا في حقل المنتجات الطبيعية تم عزل والتعرف على أكثر من 8000 مركب فينولي وتم هيكلها البنائية لها )بوبطيمة 2012) وقد توزيعها في مختلف األقسام بداللة هيكلها الكربوني (2012.(BENHAMMOU, بوجود تعرف المركبات الفينولية على أنها مستقلبات ثانوية في النباتات تتميز بنيتها األساسية أو مرتبطة بمجاميع ( سالمة 2012( حلقة عطرية أو أكثر مرتبطة بعدة مجاميع هيدروكسيلية حرة ميثيل... )2011 (KANOUN, و االختالف في عدد الحلقات وعدد األستر و اإليثر أخرى مثل : ونوع المجاميع المرتبطة بها يجعلها تنقسم إلى عدة مجاميع أهمها األحماض الفينولية الفالفونيدات القسم األكبر منها )جرموني 2009(. الفالفونيدات الدباغ حيث تمثل.2.III مصدرها توجد عديدات الفينول في العديد من األطعمة ذات المصدر النباتي وتحديدا في الفواكه والخضروات و الحبوب و البذور الزيتية و البقوليات المشروبات )النبيذ األحمر والشاي والقهوة وعصير الفاكهة( و و تعتبر الفواكه والخضروات من أهم المصادر جرموني 2009( (2012 BENHAMMOU, ; في والكمية األخرى نجدها لعديدات الفينول حيث تحتوي على حوالي نصف الكمية من عديدات الفينول والنبيذ (2012.(BENHAMMOU, القهوة و الشاي المشروبات مثل : عصائر الفاكهة.3.III أقسام عديدات الفينول عديدات الفينول هي جزئيات تتكون من حلقة بنزين على األقل تحوي مجموعة هيدروكسيل حرة أو مستبدلة يشترط فيها أن تكون مشتقة غير أزوتية و تصطنع الحلقة أو الحلقات من حمض الشيكيميك أو عديد االسيتات ( خناثة 2014( تصنف الفينوالت وفقا لعدد ذرات الكربون في الهيكل األساسي إلى عدة أقسام كما هو مبين في الجدول التالي : 51

30 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي جدول 02: أقسام عديدات الفينول (2012.)BENHAMMOU, 03

31 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي أهمية ودور عديدات الفينول في النباتات.4.III أظهرت أعمال 1977) al., (Nitsch et Nitsch, 1961; Alibert et أن الفينوالت ترتبط مع العديد من العمليات الفسيولوجية للنباتات: نمو الخاليا تمايز األعضاء اإلزهار واإلثمار. الفينوالت هي عبارة عن أصبغة و مركبات عطرية تمنح النباتات اللون و الرائحة مما تؤدي الى جذب الحشرات و الطيور الملقحة ومن األدوار المعروفة أيضا للفينوالت هي الحماية و الوقاية من األشعة الفوق البنفسجية UV كما أن لديها خصائص مضادة للفطريات و مضادة للجراثيم 2012( BENHAMMOU,.)KANOUN,2011; HARKAT,2008 ; تساهم الفينوالت في مقاومة النباتات لألمراض كما هو الحال للمقاومة نبات القطن لألمراض الذبول. كما تقوم الفينوالت بظاهرة هامة وهي ظاهرة تراكم المواد الفينولية في األنسجة النباتية المصابة أو في المناطق القريبة منها ويالحظ أيضا في المناطق المجروح الناجمة عن العوامل الميكانيكية وكذلك في حالة نقص بعض المعادن مثل النتروجين والكبريت (2012.(BENHAMMOU,.5.III االستعماالت العالجية لعديدات الفينول تستخدم عديدات الفينول بشكل متزايد في االستعماالت العالجية فهي تحتوي على مكونات فعالة لعديد من األمراض: مضادة للسرطان مضادة لاللتهابات مضادة للفيروسات مضادة للجراثيم و مكافحة تصلب الشرايين مضادة للحساسية ومضادات لألكسدة (2009.(ATHAMENA,.6.III المجموعات الفينولية Les Flavonoïdes الفالفونيدات.1.6.III Les Flavonoïdes تعريف الفالفونيدات III إن أول دراسة أجريت حول النشاط البيولوجي للفالفونيدات نشرت سنة 1936 من طرف عالم الكيمياء الحيوية Szent-gyrgyi" "Albert و الذي صنفها على أساس أنها فيتامينP )بن مرعاش 2012( و الفالفونيدات عبارة عن عائلة واسعة من المركبات الفينولية التي ينتجها النبات تحتوي على أكثر من نوع تملك بنية كيميائية مشتركة يتكون فيها الهيكل الكربوني من 15 ذرة كربون )C6-C3-C6) موزعة على حلقتين عطريتين سداسيتين )حلقة A وB ( مرتبطتين بحلقة غير متجانسة pyrane أو pyrone وتدعى بالحلقة ) C بن سالمة 2012(. و تمثل الوثيقة )03) البنية العام للفالفونيدات. 00

32 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي الوثيقة 03: البنية العام للفالفونيدات (2012.(BENHAMMOU,.1.6.III 2. أهمية الفالفونيدات بالنسبة للنبات للفالفونيدات وظائف وأدوار عديدة عند النبات منها الحماية ضد األشعة فوق البنفسجية )UV( وضد األكسدة الدفاع ضد مسببات األمراض كما يمكنها التحكم في نشاط الهرمونات المسئولة عن النمو مثل األوكسينات أيضا أهميتها في تلوين األزهار و الفواكه ففي األزهار تكون مسئولة عن إعطاء اللون المميز الذي يكون بمثابة العامل المساعد على جلب مختلف ملقحات النبات كذلك لها تأثيرات مضادة للفطريات و للميكروبات والحشرات (2009 ATHAMENA, ; ميثاق 2010 حوه 2013) III الخصائص البيولوجية و العالجية للفالفونيدات في الوقت الحاضر تم دراسة خصائص العالجية للفالفونويدات حيث تم التعرف على العديد من األنشطة البيولوجية والدوائية لها وتتمثل في: مضادات لألكسدة مضادات للحساسية مضادات لأللتهاب مضادات ألرتفاع الضغط مضادات للفطريات مضادات للفيروسات مضادات للقرحة المعدية مضادات للتشنج و لها دور في حماية الجهاز العصبي و أيضا تحمي من أمراض القلب و األوعية 2011) FERRADJI, ; عمر ; 2010 بن سالمة.(

33 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي Les acides phénoliques األحماض الفينولية.2.6.III III تعريف األحماض الفينولية األحماض الفينولية هي مركبات قابلة للذوبان في المذيبات العضوية القطبية وتنقسم إلى ثالث أقسام أحماض فينولية بسيطة و أحماض مشتقة من حمض البنزويك و أحماض فينولية مشتقة من حمض السيناميك يعتبر القسم األول نادرا ما عدا مركبات Hydroquinone التي توجد في العديد من العائالت النباتية )بن سالمة ; )KANOUN, وعموما توجد األحماض الفينولية في العديد من النباتات الزراعية و الطبية وكذلك في جميع الحبوب (2014.(BOUKRI, III الخصائص البيولوجية و العالجية لألحماض الفينولية تملك األحماض الفينولية خصائص بيولوجية مثيرة لألهتمام و تعتبر األحماض الفينولية ومشتقاتها مسئول عن العديد من النشاطات منها خافضة للحرارة مضادة لأللتهابات مطهر البولية و الكبد و محفزات حيوية و يعتبر كل من هذه األحماض acide gallique acide caféique acide chlorogénique مركبات تتميز بأنشطة مضادة لألكسدة و يعتبر acide caféique فعال جدا ضد الفيروسات والبكتيريا و الفطريات وكذلك حامض الغاليك وحمض الفيرليك التي تظهر أثار مضادة للسرطان في الرئة عند الفئران في المختبر (2012 BENHAMMOU,.(BOUKRI, ;2014 الدباغ Les tanins 3.6. )التانينات(.III تعريف الدباغ.III القشرة و 500 إلى و هي عبارة عن عديدات فينولية الجذور وفي دالتون الثمار و الفواكه الدباغ يملك تتواجد تقريبا في كل جزء من النبات الخشب واألوراق و )العنب والتمر والقهوة و الكاكاو( خاصية االرتباط ترسيبها 2012( BENHAMMOU, )KANOUN, 2011 ; تتميز أيضا أنها مواد قابلة للذوبان في الماء (2014.(BOUKRI, و تنقسم التانينات إلى مجموعتين هما: التانينات المتحللة )الذوابة( Tannins hydrolysables التانينات المتراكمة )المكثفة( Tannins condenses وزنها الجزيئي يصل بالبروتينات مشكلة معقدات مما يؤدي إلى كما أنها عبارة عن مواد قابضة و 00

34 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي التانينات دور للنبات بالنسبة III النباتات غنية بالتانينات وإصالح األنسجة التالفة و هي تستخدمها لتشديد األنسجة الرخوة (BOUKRI, 2014) الناضجة 2012(.(BENHAMMOU, III االستعماالت Astringent فقدان السوائل فوائد و إستعماالت التانينات الطبية للتانينات عن الناتجة كذلك و إتحادها و التقليل من اإلفرازات الزائدة هي مسؤولة عن الطعم الالذع للفواكه الغير بالمواد البروتينية ولهذا تستعمل في عالج اإلسهال لمفعولها القابض لألمعاء القابض التأثير تحدث مضيق لألوعية والحد من كما تستعمل في الجروح السطحية والحروق و تعمل على وقف النزيف لمفعولها القابض بإضافة إلى تأثيرها المطهر (2014 BOUKRI,.(FERRADJI, ;2011 زيادة عن هذه الخصائص التانينات لها قدرات كبيرة كمضادات لألكسدة نظرا لنوى الفينول بهم التانينات الممتحللة والمتراكمة condenses( )taninshydrolysables et أكثر فعالية من الفينوالت البسيطة )2011.(FERRADJI, هي 15 إلى 30 مرة Les terpènes التربينات. IV Les terpènes تعريف التربينات.1.IV إقترح مصطلح التربين في عام 1880 عندما عثر على المركب C 10 H 16 في زيت التربنين )حوه 2013) التربينات هي مركبات هيدروكربونية طبيعية ناتجة عن تكثيف وحدات إليزوبرين (isoprène 5-carbone 2-méthyle-1,3-butadière) Isoprène ذات 5 ذرات كربون كما هو موضح في الوثيقة )04) (2007 (PHILIPPE, والتربينات مجموعة هائلة من المنتجات الطبيعية ذات الهياكل الكربونية المتنوعة بدء ا من السالسل الخطية البسيطة و إنتهاء إلى بنى متعددة الحلقات الكربونية )حوه 2013) وقد تم تحديد أكثر من هياكل مختلفة حيث تم عزل العديد منها من الزهور الساق الجذور و أجزاء مختلفة من النبات و كذلك يمكن أن نجدها في الحيوانات و الحشرات و الكائنات البحرية (2008.(AYAD, الوثيقة 04: وحدة اإليزوبرين (2003.(DACOSTA, 02

35 الفصل الثاني مواد األيض الثانوي.2.IV تصنيف التربينات تتميزالتربينات الوحدة في تشترك بأنها األساسية و أساس على تصنف عدد الوحدات األساسية المكررة إلى: (HABA,2008) - تربينات أحادية :Monoterpènes وحدتين من اإليزوبرين ( 2 (C5H8 أي 10 ذرات كربون. - سيسكوتربينات :Sesquiterpènes 3 وحدات من اإليزوبرين (C5H8( 3 أي 15 ذرة كربون. 4 - التربينات الثنائية :Diterpènes وحدات من األيزوبرين أي (C5H8( 4 20 ذرة كربون. 5 - سيسترتربينات :Sesterterpènes وحدات من األيزوبرين (C5H8( 5 أي 25 ذرة كربون. 6 - التربيات الثالثية : Triterpènes وحدات من األيزوبرين أي (C5H8( 6 30 ذرة كربون. - التربينات الرباعية :tetraterpènes 8 وحدات من األيزوبرين (C5H8( 8 أي 40 ذرة كربون. - متعدد التربينات :Polyterpènes تنتج عن إتحاد عدد كبير - أكثر من 40 ذرة جزئية من األيزوبرين. االستعماالت.3.IV المختلفة للتربينات تستخدم العديد من تربينات كإضافات في الصناعات الغذائية و مستحضرات التجميل والكثير منهم لديهم أنشطة بيولوجية تتمثل في: مضادات للميكروبات مضادة للسرطان مضادة لأللتهابات مضادات للهيستامين )أحاديات وثنائيات التربينات( مسكنات )التربينات الثالثية( مخدر كذلك مدر للبول (2008 (AYAD, وتستخدم التربينات الثنائية في العالج الكيميائي للسرطان الرحم و الثدي وبعض أنواع السرطان الرئة (2006.(OSWALD, 00

36 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة

37 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة اإلجهاد I. التأكسدي وأ ي عرف اإلجهاد التأكسدي stress) (oxidative في النظام البيولوجي على أنه اختالل في التوازن المفرط لمولدات األكسدة و/ هذا االختالل راجع إلى اإلنتاج بين مضادات األكسدة ومولدات األكسدة نقص في مضادات األكسدة (2013.(MOHAMMEDI, I.1. المؤكسدات )الجذور الحرة( تعرف الجذور الحرة بأنها أنواع كيميائية )ذرات أو جزيئات( تملك إلكترون أو أكثر حر في يجعله في حالة وجود إلكترون حر يجعل هذه األنواع غير مستقرة و أكثر نشاطية مما المدار الخارجي بحث دائم ونشط عن اإللكترون المفقود ليكون زوجا من اإللكترونات المستقرة وهذا ما يجعله ينتزع إلكترونا من الجزيئات المجاورة مما يسبب إتالف جزيئات الخلية الطبيعية في الجسم )بوالقندول 2011(. الجزيئي األكسجين فيها يكون مواد التفاعل التفاعالت البيولوجية تقوم بأكسدة كثير من األكسيجينية النشطة األنواع تشكيل في يدخل الذي لإللكترونات المستقبل النهائي هو جذرية أو غير جذرية تكون التي يمكن أن (ROS) Reactive oxygene species.)medow et al., 2011( األكسيجينية I.2. أهم األنواع النشطة أخرى جذر فوق األكسيد ) 2 - (O Superoxide anion - يعتبر جذر O 2 بدابة العملية التأكسدية داخل الخلية ينتج حيث.(VIEL et al., 2008) هذا الجذر عن اإلرجاع إذ يمكنه التحول إلى أنواع أكسيجينية األحادي لجزيئة األكسجين عند استقبالها إللكترون تقوم مجموعة من األنظمة الخلوية اإلنزيمية اإلرجاعية بإنتاج - O 2 من %4 خارج الخلية األكسجين داخل الموجود الميتوكوندري إلى يتحول O 2 و % 20 -.(DRANKA et al., 2010) الناتج هذا من حيث يطرح Singlet oxygen األكسجين األحادي ) 2 ( 1 O يعتبر األكسجين األحادي إلكترون حر في المدار الخارجي 1 O 2 من األنواع األكسيجينية غير الجذرية يتميز بغياب و بمميزات تأكسدية عالية ينتج عن طريق التحفيز الضوئي كما يمكن أن ينتج عن إجهاد تأكسدي محفز بواسطة تنشيط الخاليا البالعة الكبيرة )macrophages( أو خالل عملية أكسدة الدهون يلحق 1 O 2 و ذلك حسب مواقع إنتاجه )جيدل 2009(. أضرارا خلوية بتفاعله مع الدهون و البروتينات و DNA 01

38 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة فوق أكسيد الهيدروجين ) 2 Hydrogen peroxide (H 2 O ينتج النوع H 2 O 2 عن عملية دسمتة (dismutation) أليون Super - (SOD) بواسطة إنزيم O 2.(VINATIER et al., 2010( حسب التفاعل التالي oxidedismutase يعتبر H 2 O 2 من األنواع األكسيجينية األكثر سمية األغشية البيولوجية لتفاعل Fenton بتفاعله كما يمكن ل H 2 O 2 أن يتحول إلى جذر OH - مع O 2 حسب المعادلة 2011) al.,.(sato et ألن غياب شحنة عليه يجعله قابل للمرور عبر في وجود بعض أيونات المعادن وفقا Hydroxyl radical الجذر (OH ) يعتبر جذر OH األكثر نشاطا واألقل استقرارا من بين مجاميع ROS حيث يملك نصف عمر صغير جدا يقدر بالنانو ثانية )2010 al.,.(aust et يتفاعل OH بسهولة مع العديد من الجزيئات التي تكون قريبة منه خاصة الدهون حيث يعمل على إزالة أو إضافة الهيدروجين لروابط غير مشبعة مما يؤدي إلى مضاعفة األضرار و زيادة بشكل كبير في السمية الخلوية التي تحدثها ROS.(CHENG et al., 2002) الجذر ) (NO Nitric oxide ينتج جذر NO عن طريق أكسدة L-arginine بواسطة إنزيم (NOS) Nitric oxide peroxynitrite (ONOO - ) إلعطاء جذر O - أن يتحد NO synthase )جيدل 2009(. يمكن ل مع 2 الذي يعتبر مؤكسد قوي جدا وعالي النشاطية والذي بإمكانه أن يساهم في هدم األنسجة في حالة االلتهابات المزمنة 2010) DIDIK,.(GEBICKA and 01

39 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة.3. I مصادر األنواع األكسجينية النشطة أ. المصادر الداخلية تنتج األنواع األكسجينية النشطة داخل العضوية كآلية للحماية ضد الجزيئات الغريبة أو كجزء من نواتج العملية األيضية عبر العديد من اآلليات الموجودة داخل الجسم (2007 al.,.(valko et األغشية الميتكوندرية تمثل الميتكوندريا المصدر الرئيسي لألنواع األكسيجينية النشطة في الفيزيولوجيا إذ تنتج حوالي % 90 من ROS عبر الميتابوليزم الخلوي و السلسلة التنفسية (2005 al.,.(balaban et يعتبر كل من المركبين NADH-ubiquinone oxidoreductase و ubiquinone-cyt c reductase من إنزيمات المتيكوندري التي تنتج O 2 - و.(GUTIERREZ et al., 2006) H 2 O 2 يتحول حوالي 4% من األكسجين الموجود داخل الميتوكوندري إلى لمادة ubisemiquinone أهم مصدر ل O 2 - O 2 - و تعتبر األكسدة الذاتية في سلسلة نقل االلكترونات في المتيكوندري وذلك عن طريق إرجاع ubiquinone حسب التفاعل التالي (2010 al., :(DRANKA et Ubiquinone + e - Ubisemiquinone + O 2 Ubiquinone + O 2 - NADPH oxidase إنزيم يتواجد إنزيم NADPH oxidase في العديد من الخاليا على مستوى الغشاء البالزمي حيث يلعب دورا أساسيا في االستجابة المناعية ضد العضيات الدقيقة و ذلك بإنتاج كميات عالية من جذر وفق التفاعل التالي )جرموني 2009). O 2 - NOS إنزيم ينتج عن هذا اإلنزيم جذر - NO في العديد من الخاليا حيث يتشكل هذا الجذر بكميات قليلة من طرف إنزيم enos أما في حالة حدوث استجابة مناعية ينشط إنزيم inos التحريضي الذي يحفز إنتاج كميات عالية من - NO )جرموني 2009(. 01

40 ك الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة تتسبب خارجية مصادر أخرى توجد ب - المصادر الخارجية باإلضافة إلى المصادر الداخلية التي تنتجها العضوية و و كما تعتبر الكحوالت و األشعة المؤينة. ROS أهمها: األشعة الفوق البنفسجية UV في إنتاج (Cu) النحاس مثل الكروم (Cr) المعادن السامة و كذلك.ROS من المصادر المنتجة ل األدوية ; 2009 الجذور الحرة ( بوبلوطة و إنتاج األكسدة لتفاعالت محفزات قوية vanadium و (V) جرموني ( 2009 ما تدخل عدة سموم منتشرة في الغذاء والمحيط )التبغ المبيدات اإلضافات الغذائية) في إنتاج الجذور الحرة عبر تنشيط اإلنزيمات (2004 al.,.(abdollahi et.4. I تأثير اإلجهاد التأكسدي على الجزيئات الداخلية إن اإلنتاج المفرط لألنواع األكسيجينة و الجزيئات المؤكسدة يلحق أضرار بالجزيئات البيولوجية خاصة اللبيدات بما في ذلك الكولسترول الغشائي و األحماض الدهنية الحرة و الغشائية.(MOHAMMEDI, 2013) DNA والبروتينات و (SACHDEV and DAVIES, 2008) فوق أكسدة اللبيدات تحتوي األغشية الخلوية على كميات كبيرة من البروتينات الدهنية و فوسفولبيدات الغنية باألحماض الدهنية غير المشبعة و التي تكون عرضة للجذور الحرة مؤدية إلى حدوث فوق أكسدة اللبيدات ( 2011 al.,.(pratt et أكسدة البروتينات تعتبر البروتينات أيضا أكثر حساسية لفعل الجذور الحرة األكسجينية مما يفقدها خصائصها البيولوجية مثل األنزيمات أو المستقبالت. إن البروتينات المؤكسدة تصبح تحمل خاصية جد ذوابة في الدهون و ذلك من خالل نزع مجاميع األمين المتأينة أو من خالل إظهار أو إخراج تلك المناطق المركزية الكارهة للماء فتؤدي إلى تكوين أكداس )تراكمات ليبيدية بروتينية على األغشية( غير طبيعية أو حول الخاليا )قندولي 2009). DNA أكسدة تؤدي أكسدة المكونات المختلفة لل DNA إلى تشكل أربعة أنواع من األضرار وهي كالتالي )بوبلوطة 2009): تغيرات على مستوى القواعد النووية. تغيرات على مستوى المواقع غير القاعدية. تشكيل جسور بين ال DNA و البروتين. كسر على مستوى السالسل )األحادية و المزدوجة (. 23

41 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة اإلجهاد التأكسدي وعالقته باألمراض.5. I إن التأثيرات التي تحدثها الجذور الحرة على العديد من الجزيئات البيولوجية يمكن أن تؤدي إلى تغيرات في شكل ووظيفة ونمو الخلية (2010 al.,.(cakir et حيث أظهرت كثير من الدراسات أن لإلجهاد التأكسدي دورا كبيرا أو لم يكن حاسما في بدء وتطوير العديد من األمراض الحالية و من األمراض التي يعتبر اإلجهاد التأكسدي محفزا رئيسيا لها هي: السرطان أمراض القلب و األوعية اإللتهابات إلتهاب المفاصل السكري الزهايمر KSOURI,2013(.)MOHAMMEDI, 2013 ;.6. I مضادات األكسدة يطلق مصطلح مضادات األكسدة على كل مادة أو مركب له فعالية ضد األضرار التأكسدي و يعمل على تأخير أو الوقاية من فعل الجذور الحرة تعمل مضادات األكسدة على الحماية بعدة طرق إما بالتثبيط المباشر إلنتاج ROS أو منع انتشارها أو هدمها )2002.(MIQUEL, و تنقسم األنظمة المضادة لألكسدة إلى أنظمة إنزيمية وأخرى غير إنزيمية I مضادات األكسدة اإلنزيمية يمتلك الجسم العديد م ن اإلنزيمات المضادة لألكسدة أهمها SOD وCAT وGPX.(DESAI et al., 2010) (SOD) Superoxide dismutase فوق أكسيد الديسميوتاز I يعتبر إنزيم (SOD) Superoxide dismutase من اإلنزيمات التي تدخل للميتابوليزم الخلوي فهو يقوم بإزالة الجذر في تحليل النواتج السامة H 2 O 2 بمساعدة بعض O 2 - المعادن مثل السيلينيوم والنحاس والزنك (2011.)KANOUN, وذلك بتسريع معدل تحوله إلى Catalase الكاتاالز I يوجد في األجسام البيروكسية Peroxisomes في خاليا أنسجة الكائنات الراقية كالدم ونخاع العظام واألغشية المخاطية والكلى والكبد كما أن هذه األجسام غنية بإنزيم آخر هو االكسيداز Oxidase فبينما يعمل االكسيداز على تكوين H 2 O 2 يقوم الكاتاالز بتكسيره وتحويله إلى ماء وأكسجين كما يوضحه التفاعل 2011).(KANOUN, 20

42 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة (GPx) جلوتاثيون Glutathion peroxidase I بيروكسيداز و المتواجد أصال في الميتكوندري و السيتوزول وهو من أهم األنظمة يمكن اعتباره إنزيم و الهيدروبيروكسيدات H 2 O 2 اإلنزيمية المشاركة في الحماية وذلك ألنه قادر على إزاحة كل من الناتجة عن أكسدة وفق التفاعالت التالية: (2011 )KANOUN, GSSG GSH يعمل إنزيم (GR) Glutathion réductase تجديد إعادة على من انطالقا يتطلب هذا التفاعل عامل مساعد هو.NADH هذا التفاعل ينتج عنه + NADP الذي يتحول من جديد إلى NADPH بواسطة انزيم G6PD.(Glucose-6phosphate-dehydrogenase) في المجموعات اآللية التفاعلية التي تتدخل في نزع السمية يمكن تلخيصها في المخطط التالي: الوثيقة 05: اآللية التفاعلية اإلجمالية تلخص نزع السمية بواسطة مختلف اإلنزيمات المضادة لألكسدة..)KANOUN, 2011) 25

43 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة مضادات األكسدة غير اإلنزيمية.2.6. I من على عكس مضادات األكسدة اإلنزيمية معظم هذه المركبات ال تنتج من طرف العضوية وقد تأتي الجزيئات من كل المركبات هذه تشمل األغذية الصغيرة مثل الفيتامينات Vit. C و Vit. E.(KARTHIKEYAN and RANI, 2003) glutathione تتميز مضادات األكسدة غير اإلنزيمية بأوزان جزيئية منخفضة والقدرة على الوقاية أضرار اإلجهاد التأكسدي( 2007 CHAN,.(YIN and E و الفيتامين C الفيتامين I الكيميائية يمكن يقوم كل ل وذلك من Vit. C و Vit. E عن طريق األكسدة عملية أو الحد من و بمساعدة النظام الدفاعي للجسم على إزالة سمية بعض المواد في واالختزال الجسم 2010) al.,.(calabrese et Vit. C أن يقوم بإزاحة كل من OH NO O 2 - إستخالب المعادن و منع أكسدة.(TRABER, (2007 LDL الدهون هذه يعتبر يتفاعل α-tocopherol من Vit. E باسم المعروف و الناتجة عن المركبات األيض الخلوي المضادة لألكسدة يمكنه كما الذائبة في يتواجد على مستوى األغشية ويثبط سلسلة تفاعالت فوق أكسدة الدهون (2007.(TRABER, الجذور و فيتامين E يتحول الجذور مع الليبيدية بدوره إلى جذر حر لكنه و يمنع أقل انتشارها نشاطا مقارنة حيث يعمل على بجذر البيروكسيل إستخالب )LOO ) (NAZIROGLU et al., 2010) بإرجاع وذلك كما يعمل Vit. C على الجذر( α-to ).(RYAN et al., 2010) α-tocopheryl الرفع من فعالية Vit. E الوثيقة (06( Glutathion الجليتاثيون I الجليتاثيون (GSH) عبارة عن ببتيد قصير مكون من ثالثة أحماض أمينية هي glutamic و cysteine و glycine يوجد الجليتاثيون في األنسجة الحيوانية ويلعب دورا مهما كمضاد لألكسدة داخل الجسم )بن خناثة 2014( حيث يحمي الخلية من التلف التأكسدي عبر اختزال البيروكسيداز و جذر O2 - التفاعل مباشرة مع الجذور الحرة مثل GSH يستطيع.(JAN et al., 2011) α-to و )GS - ) حيث تفقد مجموعة الكبريت ذرة هيدروجين مما يؤدي إلى إنتاج جذر LOO و LO OHو.(BILJAK et al., (2010 (GSSG) بإمكانه االنضمام إلى جذر آخر لتكوين جزيئة thiyl 20

44 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة الوثيقة 06: آلية التخلص من الجذور اللبيدية بواسطة Vit. C و Vit. E و الجلتاثيون.(RYAN et al., 2010) Carotenoides الكاروتينويدات I الكاروتينويدات Carotenoides هي مواد صبغية موجودة في الفواكه والخضر)بن ذهبية 2013) وتتميز بوجود العديد من الروابط المزدوجة في النمو وتعتبر بادرات للفيتامين A الضروري للرؤية تأثيراتها المضادة للتأكسد بنيتها أكسبها فعل المضادة لألكسدة. حيث بينت العديد من التجارب In vitro الكانس للجذور الحرة )قندولي 2009( I المشتقات الفينولية النباتية ترجع أغلب التأثيرات المضادة لألكسدة للمركبات الفينولية الى خصائص األكسدة واإلرجاع التي وتعتبر الفالفونيدات واألحماض الفينولية من أقوى المركبات تملكها والتي تجعلها كعوامل مرجعة. و للفالفونيد الكيميائية المضادة لألكسدة ( بوبطيمة 2012(. I.7. الفالفونيدات والنشاط المضاد لألكسدة يعود التأثير المضاد لألكسدة للفالفونيدات إلى وجود عالقة بين البنية نشاطها المضاد لألكسدة و قد أدت األبحاث التي أجريت على النماذج المخبرية و التي اهتمت بالعالقة بين البنية الكيميائية للفالفونيد و نشاطه المضاد لألكسدة إلى التوصل و التعرف على المجاميع و المواقع النشطة في اآللية المضادة لألكسدة )بن مرعاش 2012). 22

45 الفصل الثالث اإلجهاد التأكسدي ومضادات األكسدة الوثيقة 07 : المواقع الفعالة في النشاط المضاد لألكسدة للفالفونيدات.)CAZAROLLI et al., 2008) I.1.7. آلية الفالفونيدات المضادة لألكسدة تعمل الفالفونيدات على الوقاية من اإلجهاد التأكسدي و بإمكانها أن تمنع اإلصابات الناتجة عن الجذور الحرة بعدة طرق منها )بن مرعاش 2012(: االقتناص المباشر للجذور الحرة..ROS إستخالب األيونات المعدنية المسئولة عن إنتاج تثبيط اإلنزيمات المولدة للجذور الحرة. تنشيط و تجديد األنظمة المضادة لألكسدة. I.2.7. تفاعل الفالفونيدات مع الجذور الحرة تملك الفالفونيدات بنية خاصة تمكنها من التفاعل مع األنواع الجذرية و إعطائها إستقرارية أكبر O2 - حيث تقوم الفالفونويدات (Flavon-OH) بإرجاع الجذور األكسجينية ) R) مثل و OH و LO و LOO و ذلك بنقل الهيدروجين أو إلكترون الوثيقة (08) تتفاعل النواتج ) الجذور الفالفونويدية ( المؤكسدة مع بعضها إلنتاج بنية quinine مستقرة (2000 (PIETTA, كما تتعرض الفالفونويدات إلى عدة تغيرات بعد إمتصاصها منتجة بذلك أشكال مختلفة التي بإمكانها أن تعمل كعوامل مرجعة و مزيحة ل.(HE et al., 2010) ROS الوثيقة 08: تفاعل الفالفونيدات مع.(PIETTA, (2000 ROS 20

46 العملي الجزء

47 األول الفصل و الطرق المواد

48 الفصل األول المواد والطرق I.األدوات و المواد المستعملة في الدراسة I.1. األدوات واألجهزة المستعملة أنابيب اختبار essai) (tubes, بيشر (Bécher), قمع (Entonnoir), ملعقة Pipette Erlenemeyer Ballons (Papier à filter) ورق الترشيح,)Spatule) (Balance électronique) ميزان إلكتروني Bec benzene موقد بنزن Micropipette حاضنة (Etuves) جهاز التبخير الدوراني )Rotavapeur) حمام مائي Marie),)Bain جهاز مطيافية األشعة فوق البنفسجية.(Spectrophotometers( I.2. المواد الكيميائية المستعملة حمض كلور الماء كلوروفورم ( 3 )CHCl ماء مقطر ) O ( H 2 OH( ) C 2 H 5 اإليثانول (CH 3 OH) الميثانول )H 2 SO 4 ( حمض الكبريت )FeCl 3 ( ثالثي كلور الحديد alcool (HCl( هيدروكسيد réactif de Dragendroff كاشف دراجندروف كاشف وانر réactif de Wagner كلوريد حمض الغاليك ( 3 (Na 2 CO كربونات الصوديوم Folin Ciocalteu كاشف الصوديوم مولبيدات األمونيوم فوسفات الصوديوم ) 4 (Na 2 HPO الكرستين quercetin ( 3 (AlCl األلمنيوم. DPPH محلول حمض األسكوربيك (NH4( 2 MoO4 من نبات.Zygophyllum album L فقط.II المادة النباتية نستعمل في هذه الدراسة األجزاء الهوائية.1.II القطف هو نبات مستوطن حيث يتواجد في جميع األماكن تم قطفه Zygophyllum album L نبات خالل فترة بمنطقة الوادي )بضواحي جامعة الشهيد حمه لخضر- الوادي( خالل شهر فيفري 2015 اإلزهار و اإلثمار..II.2 التجفيف بعد القطف يتم التجفيف في الظل بعيدا عن الرطوبة و بمكان جيد التهوية في درجة حرارة الغرفة لمدة ثالثة أسابيع..II.3 الطحن و يتم االحتفاظ تم تحضير مسحوق النبات بطحن المادة النباتية الجافة في مطحنة كهربائية بمسحوق في قارورات زجاجية محكمة اإلغالق مع استبعادها عن الضوء و الحرارة إلى حين استعمالها. 21

49 الفصل األول المواد والطرق.III طرق العمل Zygophyllum album L الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في نبات.1.III يتم الكشف الكيميائي عن بعض المواد الفعالة في النبات وذلك حسب (2013 :)ZEGHEB,.1.1.III القلويدات 10 إليها نضيف غرام وزن 5 الجافة النبتة مسحوق م ن نقوم بأخذ مل من حمض HCl المخفف 1/10 يترك لبضعه دقائق لنقع اختبار و نضيف إليه بعض قطرات م ن ثم يرشح المحلول الكواشف التالي: 1 ثم نأخذ منه - - كاشف دراجندروف :(Dragendroff( مل و نضعه في أنبوب وجود القلويدات بتشكل راسب برتقالي. كاشف وانر (Wagner) : وجود القلويدات بتشكل راسب بني..2.1.III الفالفونيدات 1 عن طريق نقع لمدة 24 ساعة 5 نأخذ 10 غرام من مسحوق النبتة الجافة في 150 مل من حمض HCl المخفف إلى ثم نقوم بعملية الترشيح و إجراء مل من الرشاحة العلوي من انبوب االختبار إذا كانت.3.1.III التربينات يرشح المحلول تتشكل طبقتين التالي: االختبار و نضيف إليها 2.5 مل من الكحول ذو لون هذا أصفر فاتح تتشكل طبقة كحولية في الجزء يعني وجود الفالفونويدات في هذا النبات. نأخذ 5 غرام من مسحوق النبتة الجافة و نذوبها في 20 مل من الكلوروفورم ( 3 )CHCl نأخذ 1 مل من المحلول المرشح و نضيف إليها الطبقة ذات اللون األخضر تشير إلى وجود التربين. H 2 So 4 ثم بعناية على جدران األنبوب.2.III الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في المستخلصين المائي والكحولي لنبات Z. album Z. album في ضوء دراستنا عن النشاطية المضادة لألكسدة للمستخلصين اإليثانولي و المائي لنبات فقد اجرى التحري عن محتوى المستخلصين لبعض المركبات الفعالة التي تحتويها..1.2.III الكشف عن الصابونين الكشف عن الصابونين حسب (2011 (KANOUN, و ذلك إلى 2 مل من المستخلص المائي أو اإليثانولي ثم يرج المحلول بقوة تقييم محتوى الصابونين كالتالي: بإضافة ثم يترك القليل من الماء المقطر لمدة 20 دقيقة و يتم 21

50 الفصل األول المواد والطرق عدم تشكل رغوة = اختبار سلبي وهذا يعني عدم وجود الصابونين. رغوة أقل من 1 سم = اختبار إيجابي ضعيف وهذا يعني وجود الصابونين بكمية ضعيفة. رغوة من 2-1 سم = اختبار إيجابي وهذا يعني وجود الصابونين. رغوة أكثر من 2 سم = اختبار إيجابي للغاية وهذا يعني غني جدا بالصابونين ن.2.2.III الكشف عن التانينات 1 مل المستخلص المائي أو اإليثانولي للكشف ع وجود التانينات و ذلك بإضافة ل 1 مل من ظهور اللون أخضر داكن المخفف إلى 1 2 قطرات من محلول FeCl 3 إلى من الماء المقطر و 1 أو أخضر مزرق يدل على وجود التانينات (2011.(KANOUN,.3.2.III الكشف عن الفالفونيدات يتم الكشف عن الفالفونيدات بمزج 2 مل من المستخلص المائي أو اإليثانولي مع 1 مل من ظهور اللون األصفر دليل على وجود الفالفونيدات )نعمه هيدروكسيد الصوديوم بتركيز( 0.5 ( موالري و آخرون. 2007(..4.2.III الكشف عن القلويدات ل 1 مل من المستخلص المائي أو اإليثانولي عدة قطرات من الكواشف التالية: و ذلك بإضافة Dragendroff ظهور راسب برتقالي و كاشف دراجندروف كاشف Wagner ظهور راسب بني )نعمه وآخرون. 2007(. 3. طريقة تحضير المستخلص المائي و اإليثانولي لنبات.Z album.iii نأخذ عينة من مسحوق النبتة الجافة وزنها 30 غرام مع 120 مل من الماء المقطر في حالة المستخلص المائي و اإليثانول في حالة المستخلص الكحولي و تنقع لمدة 24 ساعة في درجة حرارة المخبر وبعدها يتم الترشيح (تكرار العملية ثالث مرات أي ير شح بعد كل 24 سا ثم نضيف الماء المقطر في حالة المستخلص المائي و اإليثانول للمستخلص اإليثانولي في كل مرة بعد الترشيح لمدة 3 أيام) وبعد الحصول على الرشاحات الثالثة تعرض لعملية التبخير باستعمال جهاز التبخير تحت درجة حرارة 60 م بالنسبة للمستخلص اإليثانولي أما المستخلص المائي تحت درجة حرارة 65 حيث نحصل في النهاية على ناتج عبارة عن المستخلص الخام ي ح فظ ل حي ن اإلستخدام.(Rebiai et al., 2014) 03

51 الفصل األول المواد والطرق 32 غ مادة نباتية الجافة مل ماء / إيثانول نقع 24 ساعة (Macération( الترشيح 1 الرشاحة (1( المتبقي مل ماء / إيثانول نقع 24 ساعة (Macération( الرشاحة (2( الترشيح 2 المتبقي مل ماء / إيثانول نقع 24 ساعة (Macération( الرشاحة )3) الترشيح 3 تجميع الرشاحة (1) (2) (3) تبخير Evaporation حساب المردود الوثيقة 09: مخطط يوضح مراحل األستخالص للمستخلصين اإليثانولي والمائي لنبات.Z album 00

52 الفصل األول المواد والطرق 4. حساب المردودية االنتاجية للمستخلصات.III المردودية االنتاجية للمستخلصات هي النسبة بين كتلة المادة النباتية الجافة المستخلصة التي تم الحصول عليها والتي نرمز لها ب ( ) على كتلة المادة النباتية الجافة المستخدمة ويرمز لها بالرمز) ( ويحسب باستخدام العالقة التالية: % = ( / ) % : المردودية االنتاجية للمستخلصات ب % : كتلة المادة النباتية الجافة المستخلصة بعد تبخير المذيب : كتلة المادة النباتية الجافة المستخدمة في االستخالص (2014.(BOUKRI, الوثيقة 10: جهاز Rotavapeur المستعمل في الدراسة )صورة فوتوغرافية أصلية(. 05

53 الفصل األول المواد والطرق Z. album المركبات تقدير الفينولية و الفالفونيدية للمستخلصات لنبات.5.III المركبات تقدير الفينولية الكلية.1.5.III تم تقدير عديدات الفينول الكلية باستخدام كاشف Folin-Ciocalteau حسب طريقة (2013) SINGHAL CHAVAN and حيث تعتمد هذه الطريقة على إرجاع مكونات كاشف Folin- Ciocalteau بواسطة المركبات الفينولية إلعطاء كينون أو كيتون المتميزة باللون األزرق. نمزج 0.2 مل من تراكيز مختلفة من المستخلصات المذابة في الماء أو اإليثانول مع 1 مل من محلول Folin-Ciocalteau المخفف 10 مرات ترج األنابيب وتحضن في درجة حرارة المخبر لمدة 5 دقائق بعدها نضيف 0.8 مل من كربونات الصوديوم %7.5 ترج األنابيب وتحضن في درجة حرارة المخبر لمدة نصف ساعة. تقاس امتصاصية المحلول الناتج عند طول موجة 765 نانومتر بجهاز مطيافية األشعة فوق البنفسجية.Spectrophotometers نستعمل حمض الغاليك لتحديد منحى العيارية و يتم التعبير عن النتائج بعدد الملغرامات الموافقة لحمض الغاليك لكل غرام من وزن المستخلص Extrait).(mg AGE /g التقدير الكمي.2.5.III للفالفونيدات تم التقدير الكمي للفالفونيدات بطريقة كلوريد األلمنيوم AlCl 3 حسب al., MBAEBIE et (2012( نأخذ 0.5 مل من تراكيز مختلفة من المستخلصات المذابة في اإليثانول أو الماء ونضيف لها 0.5 مل من محلول AlCl 3 بتركيز 2 % فيظهر اللون األخضر المصفر و نتركها في الضالم لمدة ساعة ثم تقرأ اإلمتصاصية عند طول موجة 420 نانومتر. نستعمل الكرستين لتحديد منحى العيارية ويعبر عن النتائج بعدد الملغرامات الموافقة للكرستين لكل غرام من وزن المستخلص( Extract.(mg QE/g الفاعلية تقدير المضادة لألكسدة.6.III لغرض تقدير الفعل اآلسر للجزئيات المضادة للتأكسد للمستخلصين قمنا باختبار موليبدات الفوسفات و إختبار DPPH حيث كال من هاتين الطريقتين تعتمد على التلوين ونزع التلوين في طول موجي معين. 00

54 الفصل األول المواد والطرق )CAT( اختبار القدرة الكلية المضادة لألكسدة.1.6.III من المبدأ تم قياس القدرة الكلية المضادة لألكسدة للمستخلصين باستعمال طريقة الفوسفوموليبدات ARDESTANI and YAZDANPARAST (2007) حسب (phosphomolybdenum) الطرق المباشرة القدرة لقياس اإلرجاعية لمضادات اإلنزيمية الغير األكسدة الموليبدات ) 4-2 Molybdate (MoO من طريقة العمل إلى (Mo) Molybden على تعتمد و هي إرجاع هذه األخيرة التي تتميز بلون أخضر فاتح. نأخذ 0.1 مل من تراكيز مختلفة من المستخلصات المذابة في اإليثانول أو الماء و نضيف لها 1 مل من محلول موليبدات الفوسفات الذي حضر بمزج 0.6 موالري من حمض الكبريتيك ( 4 H) 2 SO و 28 mm المزيج فوسفات االمتصاصية الصوديوم في الضالم عند 4 mm و (Na 3 PO 4 ) موليبدات من األمونيوم في حمام مائي حرارته C 95 لمدة 90 دقيقة. موجة طول (NH 4 ( 2 MoO4 نانومتر 695 بجهاز.Spectrophotometers حيث يعبر عن النتائج بعدد الملغرامات من وزن المستخلص Extract).(mg AAE/g مطيافية الموافقة يوضع ثم بعدها نترك األنابيب تبرد ثم نقيس فوق األشعة لحمض األسكوربيك البنفسجية لكل غرام إختبار DPPH تثبيط الجذر الحر.2.6.III المبدأ اختبار DPPH هو اختبار مضاد للجذور الحرة حسب BLOIS سنة 1958 هذا االختبار يعتمد على تثبيط الجذر الحر DPPH وذلك اعتمادا على قابلية إعطاء المستخلصات )مضادات األكسدة( للجذرالحر DPPH لذرة هيدروجين و يظهر اللوني التفاعل خالل من ذلك الذي البنفسجي اللون ذو يتحول إلى DPPH-H ذو اللون األصفر كما هو موضح في الوثيقة التالي:. الوثيقة 11 : التحول الذي يحدث للجذر الحر DPPH )بن خناثة 2014). 02

55 الفصل األول المواد والطرق طريقة العمل تحضن 200μl من عدة تراكيز مختلفة من المستخلصات المذابة في الماء أو اإليثانول مع 800 μl من محلول DPPH بعد 30 دقيقة من الحضن في الظالم تقاس االمتصاصية عند طول موجة 517 نانومتر في هذه الدراسة حمض األسكوربيك كأساس مرجعي في آسر الجذور الحرة وتحدد القدرة المضادة لألكسدة بتحديد معامل هو ويعرف مقدار IC 50 على أنه تركيز المستخلص IC 50 )مضاد أكسدة( الالزم لتثبيط 50% من جذر DPPH والذي يحسب من خالل منحنيات تغير نسبة التثبيط %I بداللة تراكيز المستخلصات حيث تحسب نسبة التثبيط وفق العالقة التالية: I% A A A 0 i (517nm) عند DPPH امتصاصية :A 0.(517nm) في وجود المادة المدروسة بعد 30 دقيقة عند DPPH امتصاصية A: i %I: نسبة تثبيط العامل المضاد لألكسدة لجذر. 00

56 الثاني الفصل النتائج و المناقشة

57 الفصل الثاني النتائج والمناقشة. I نتائج اختبارات الكشف الكيميائي Zygophyllum album الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في نباتL 1.I.اختبارات اختبارات الكشف الكيميائي تتضمن الكشف عن مختلف المركبات الفعالة الموجودة في النبات المدروس و ذلك من خالل اختبار تفاعالت نوعية. و تعتمد هذه التفاعالت إما بتشكل راسب أو بتغير في اللون بواسطة الكواشف الخاصة بكل عائلة من المركبات الفعالة وكانت نتائج اختبارات الكشف النوعية المطبقة في نبات.Z album كالتالي: I.1.1. القلويدات: بالنسبة للقلويدات بعد إضافة قطرات من كاشف Wagner نالحظ تشكل راسب بني هذا دليل على وجود القلويدات في هذا النبات. I.2.1. الفالفونيدات: بإضافة الكحول تشكلت طبقة كحولية في الجزء العلوي من أنبوب االختبار ذات لون أصفر فاتح وهذا يدل على وجود الفالفونيدات في هذا النبات. I.3.1. التربينات: بإضافة H 2 So 4 على جدران األنبوب نالحظ تشكل طبقتين طبقة بلون أخضر داكن و طبقة عديمة اللون الطبقة الخضراء الداكنة تشير إلى وجود التربينات في هذا النبات. إذن أظهرت نتائج االختبارات الكشف الكيميائي األولي أن النبات يحتوي على مختلف العائالت للمنتجات الطبيعية: التربينات و الفالفونيدات و القلويدات كما هو موضح في الوثيقة )12(. كما وجدنا أن هذه النتائج التي توصلنا إليها متفقة مع أعمال كل من (2013) al., KSOURI et و (2013) ZEGHEB التي أجريت على نفس النبات وأكدت وجود التربينات في هذا النبات و كذلك أعمال (2012) al., DEBOUBA et و( 2014 ) EL-AMIER and ABDULLAH و( 2014 ) al., KHACHEBA, et والتي كشفت عن وجود الفالفونيدات و القلويدات في هذا النبات. هذه النتائج تعطينا توقعات جيدة للنشاط البيولوجي للنبات على الرغم من أنها عامة إال أنها تبقى مشجعة خاصة وأن هذه المركبات ومن المعروف أنها تشارك في العديد من األنشطة البيولوجية من بينها مضادات للفطريات مضادات للفيروسات مضادات لألكسدة (2009.(ATHAMENA, 01

58 الفصل الثاني النتائج والمناقشة القلويدات الفالفونيدات التربينات الوثيقة 12: توضح نتائج اختبارات الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في نبات.Z album I.2. اختبارات الكشف الكيميائي لبعض المواد الفعالة في المستخلصين المائي والكحولي لنبات.Z album نالحظ أن نتائج الكشوفات الكيميائية كانت إيجابية لكل من المستخلصين المائي و اإليثانولي كما وردت في الجدول )03( و هذا يعني أن كل من المستخلصين المائي و الكحولي يحتوي على المواد الفعالة التالية: الفالفونيدات القلويدات التانينات و الصابونين إال أنه في الصابونين كانت عالية جدا في كال المستخلصين و هذا ما يشير أن هذا النبات غني جدا بمادة الصابونين. أغلب أن إلى ونشير النبات كمطهر لهذا استعماالت و لأللتهابات الجلد وهذا يفسر بمادة ثراءه الصابونين 2008).(AYAD, 01

59 الفصل الثاني النتائج والمناقشة الجدول) 03 ): يوضح نتائج الكشوفات الكيميائية للمستخلصين المائي و اإليثانولي لنبات.Z album المركبات الفعالة الفالفونيدات القلويدات التانينات الصابونيات المسستخلص المائي المستخلص اإليثانولي ( - (: غياب المادة الفعالة. ( + (: وجود المادة الفعالة. ( +++ (: غني جدا بالمادة الفعالة. و مقارنتا بأعمال ل (2014) ABDULLAH EL-AMIER and و al., MNAFGUI et (2012) و BENHAMMOU(2012) فهي موافقة لنتائج هذه الدراسة حيث وجد أن المستخلص الميثانولي من نفس هذا النبات غني بالفالفونيدات و التانينات و القلويدات والصابونيات و كذلك (2009) BOUMAZA, في دراسة ل وجدت هذه المواد الفعالة في المستخلص الميثانولي من نبات Zygophyllum cornutum التابع لنفس الجنس لنبات المدروس. و كما تتوافق أيضا نتائج المستخلص المائي مع نتائج التي توصل إليها كل من al., BELGUIDOUM et حيث وجد أن المستخلص المائي المتحصل عليه من أعمال (2015( خليط )إيثانول + ماء( من نفس هذا النبات يحتوي على عديدات الفينول و الفالفونيدات و التانينات. 01

60 الفصل الثاني النتائج والمناقشة المستخلص المائي المستخلص اإليثانولي الوثيقة 13: صورة تبين المستخلصين المائي و اإليثانولي لنبات.Z album المردودية إلنتاجية المستخلصات.3.I تم حساب المردودية إلنتاجية المستخلصات انطالقا من كتلة المادة النباتية الجافة المستخدمة وكتلة المادة النباتية الجافة المستخلصة لكال المستخلصين وكانت نسبة المردودية اإلنتاجية لكال المستخلصين كما هي موضحة في الشكل )01( : 23

61 الفصل الثاني النتائج والمناقشة المردودية % Rendement 7.30% 7.28% 7.25% 7.20% 7.14% Rendement 7.15% 7.10% 7.05% E.Eth E.Aq نوع المستخلص الشكل( 01 ): المردودية إلنتاجية المستخلص المائي و اإليثانولي لنبات.Z album نالحظ أن نسبة المردودية إلنتاجية المستخلص اإليثانولي قدرت ب ( 7.28%( وهي نسبة متقاربة للنسبة المتحصل عليها من المستخلص المائي والمقدرة ب (7.14%). ويرجع هذا االختالف البسيط في قيم المردودية إلنتاجية المستخلصين لألختالف في نوع المذيب كما يالحظ أن كمية المردودية المتحصل عليها للمستخلص اإليثانولي )7.28%) كانت أقل مقارنة بالنسبة للمردودية المتحصل عليها لدى (2012) BENHAMMOU من المستخلص الميثانولي لنفس النبات و المقدرة ب )14.305%) و هذا االختالف يرجع إلى نوع المذيب وأيضا إلى الجزء النباتي المدروس حيث استخدم في هذه الدراسة األجزاء الهوائية من هذا النبات الساق فقط. نبات Z. album المركبات تقدير الفينولية و الفالفونيدية لمستخلصات.4.I المركبات تقدير الفينولية الكلية.1.4.I بإستعمال منحنى العيارية لحمض الغاليك للمستخلص اإليثانولي والمائي الموضح في الشكلين )2 و 3 ( تم تدوين النتائج المتعلقة بتقدير المركبات الفينولية للمستخلصات اإليثانولية و المائية كما هو موضح في الشكل (04(: 20